Namen druge faze bakteriološke metode: pridobitev čiste kulture mikroorganizmov in njeno kopičenje. Če želite to narediti, izvedite:

· Makroskopsko preučevanje kolonij v prepuščeni in odbiti svetlobi (značilnost velikosti, oblike, barve, prosojnosti, konsistence, strukture, konture, površine kolonij).

· Mikroskopski pregled izoliranih kolonij, nato pa priprava in pregled brisov iz teh kolonij.

· Sejanje vrst, specifičnih za kolonijo, na čiste gojišča ali izbirna gojišča in inkubacija v optimalnih pogojih.

Kulturne značilnosti mikrobov so odvisne od narave njihove rasti na hranilnih medijih. Stalne za vsako vrsto mikrobov so pomembna diagnostična značilnost.

Pri izbiri čiste kulture mikroorganizma je treba biti pozoren na naravo rasti mikroba, tj. o kulturnih značilnostih kot enem od znakov, ki omogoča identifikacijo roda, vrste mikroorganizma. Pri gojenju mikroba na tekočih medijih lahko vidite rast bakterij v obliki:

a) razpršena meglica;

b) spodnja in parietalna rast v prozornem okolju;

c) površinski film;

d) "bombažna kroglica".

V poltekočih medijih lahko opazite:

a) razpršena rast okoli injekcijskega pridelka (gibljive bakterije);

b) rast med injiciranjem (nepremične bakterije);

c) ruptura medija ali tvorba plinskih mehurčkov.

Na gostih medijih je opaziti:

a) rast v ločenih kolonijah;

b) rast z neprekinjenim cvetenjem.

Rast mikrobov na trdnem hranilnem mediju. Za preučevanje lastnosti kolonij gojijo mikrobe na trdnih hranilnih medijih v petrijevskih posodah. Pri setvi materiala poskušajte doseči izolirano rast kolonij.

Po naravi kolonij ločimo naslednje vrste:

· S-tip (iz angleščine gladek - gladek) - za kolonije je značilna okrogla in konveksna oblika, gladka površina, vlažna konsistenca;

· Za kolonije tipa R (iz angleščine rough - rough) so značilne hrapave površine, nepravilni robovi, suha konsistenca. Nastane iz gladkih S-oblik kot posledica mutacij. Med disocijacijo opazimo prehod S-oblik v R-oblike. Pojav disociacije pri patogenih mikrobih opazimo pod vplivom antibiotikov in kemoterapije, dejavnikov specifične imunosti, ki nastanejo med infekcijskim procesom, pa tudi okoljskih dejavnikov.

Poleg teh dveh glavnih vrst kolonij obstaja še sluzast tip M (iz latinskega mucus - sluzast), za katerega je značilna viskozna sluznica. Nastane v procesu disociacije bakterijskih kultur.

Vsaka vrsta bakterij tvori kolonije z različnimi lastnostmi. Njihov značaj se preučuje s prostim očesom v prepuščeni in odbiti svetlobi ter z lupo ali mikroskopom z majhno povečavo. Na začetku študije se skodelica obrne na glavo in skodelice se pregledajo v prepuščeni svetlobi. Če obstajajo različne kolonije, je vsaka od njih oštevilčena in opisana posebej. V protokolu so navedene naslednje značilnosti.

1. Velikost kolonij je določen s premerom (velik - s premerom 4-6 mm in več, srednji - 2-4 mm, majhen - 1-2 mm in končni - manj kot 1 mm).

2. Oblika kolonij (pravilna okrogla, nepravilna ameba, rozeta, rizoid - zožena, podobna prepletajočim se drevesnim koreninam itd.).

3. Stopnja preglednosti (neprozorna, prosojna, prozorna).

4. Struktura kolonij. Po naravi strukture ločimo naslednje vrste kolonij:

· Hialin - brezbarven, prozoren, brez vidne natančne strukture;

· Zrnat, ki ga glede na velikost zrn delimo na drobnozrnata in grobozrnata;

· Nitaste ali vlaknaste, za katere je značilna prisotnost dolgih, gosto prepletenih filamentov v debelini kolonije. Kolonije so homogene in heterogene. Struktura prvega je v vseh delih enaka, v drugem se osrednji del razlikuje od obrobnega ali pa imajo posamezni sektorji strukturo, ki ni enaka preostali masi.

5. Barva kolonije določa pigment, ki ga tvori mikrobna kultura. Velika večina patogenih bakterij ne tvori pigmenta, zaradi česar so njihove kolonije brezbarvne ali mlečno motne, podobno kot opali. V prepuščeni svetlobi so takšne kolonije bolj ali manj prozorne. Vrste mikrobov, ki tvorijo pigmente, dajejo kolonije različnih barv: smetano, rumeno, zlato oranžno, modro, rdečo, lila, črno itd.

6. Narava površine (hrapava, sijoča, mat, suha, mokra, gladka, radialno ali koncentrično progasta).

7. Narava robne konture. Ločite med gladkimi robovi v obliki jasno določene črte in neenakomernimi. Slednje delimo na:

· Pokrovačen rob, sestavljen iz velikih, rahlo zaobljenih ali sploščenih zob pravilne oblike;

· Valovit rob, ki se nekoliko razlikuje od pokrovljenega, ker njegovi veliki zobje niso jasno izraženi;

· Erodiran ali nazobčan rob, sestavljen iz ostrih zob različnih velikosti in oblik;

· Obrobljen rob z nežnimi resicami. V nekaterih primerih ni jasno določene črte, ki bi omejevala kolonijo od površine medija. Ta rob kolonije se imenuje zamegljen.

8. Olajšanje za katero je značilna njegova višina nad površino hranilnega medija in obris oblike v navpičnem odseku. Ločite relief: konveksno, vdolbino, ravno, stožčasto, kupolasto, ravno s stožčastim središčem, z odebeljenimi valjastimi robovi itd.

9. Doslednost kolonije, ki določa njegovo fizično kondicijo, se pregleda z dotikom ali odvzemom dela materiala iz njega z bakteriološko zanko z bakterijsko zanko. Po naravi konsistence so kolonije:

· Pasto, enostavno odstranljivo in erodirano na površini hranilnega medija, kot je maslo;

Viskozno ali sluzasto, se drži in vleče za zanko

· Vlaknati ali usnjeni, gosti, odstranljivi s površine hranilnega medija v obliki elastičnega filma, ki ustreza velikosti in obliki kolonije;

· Krhka, suha, drobi se ob dotiku zanke.

Kolonije nekaterih vrst bakterij rastejo v debelino hranilnega medija, kar določa tudi bakteriološka zanka.

10. Vonj - manj pomembna značilnost kolonij, saj so asociacije, ki jih povzročajo, subjektivne. Številne vrste bakterij v procesu gojenja na hranilnih medijih sproščajo posebne aromatične snovi. Zlasti kulture Pseudomonas aeruginosa imajo vonj po karameli, kulture listerije - mlečna sirotka, nokardija - sveže izkopana zemlja, Proteus - gnojni vonj.

III. Načrt praktičnega dela

1. Preučiti kulturne lastnosti kolonij, gojenih na MPA (pregled cepljenj iz prejšnje lekcije)

2. Odstranite izolirano kolonijo (čista kultura) (z udarci) na akumulacijskem mediju (poševen MPA)

3. Preučite in skicirajte vzorec rasti različnih bakterij na preprostih in kompleksnih hranilnih medijih

4. Izpolnite tabelo "Razvrstitev mikroorganizmov po vrstah dihanja"

5. Rešujte situacijske naloge

Setev je pomembna stopnja bakterioloških raziskav. Glede na namen študije, naravo semena in gojišča se uporabljajo različni načini setve. Vsi vključujejo obvezen cilj: zaščititi setev psov pred tujimi mikrobi. Zato je treba delo opraviti hitro, vendar brez nenadnih gibov, ki povečajo vibracije * zraka. Med setvijo ne morete govoriti. Sejanje je najbolje opraviti v škatlo (pri delu z nalezljivim materialom je treba upoštevati osebna varnostna pravila).

Faze izolacije čiste kulture:

1. dan - pridobivanje izoliranih kolonij. Kašeta preskusnega materiala se z zanko, pipeto ali stekleno palico nanese na površino agarja v Petrijevi posodi. Shpa-i telo vtrite material v površino medija; brez žganja ali obračanja lopatice se setev izvede na 2. in tako na 3. skodelico. Pri takšni setvi 1 skodelica vsebuje veliko materiala in temu primerno veliko mikrobov, 2 manj in 3 še manj.

Izolirane kolonije lahko dobimo s sejanjem z zanko. Za to se preskusni material emulgira v juhi ali izotonični raztopini natrijevega klorida.

2. dan - preučite rast mikrobov na ploščah. V 1. posodi je običajno neprekinjena rast - izolirane kolonije ne bo mogoče izolirati. Izolirane kolonije rastejo na površini agarja v 2. in 3. plošči. Preučujejo jih s prostim očesom, s povečevalnim steklom, z mikroskopom z majhno povečavo in včasih s stereoskopskim mikroskopom. Želena kolonija je označena na dnu plošče in subkultivirana na pošev agarja. Posevke damo v termostat. (Ponovno je mogoče ponovno zasaditi samo izolirane kolonije.)

3. dan - preučite vzorec rasti na poševnem agarju. Naredijo si razmaz, ga obarvajo in potem, ko se prepričajo, da je kultura čista, jo začnejo preučevati. Tu se osamitev čiste kulture konča. Kultura, izolirana iz določenega vira in proučena, se imenuje "sev".

Ko iz krvi izoliramo čisto kulturo (hemokulture), jo predhodno "gojimo" v tekočem gojišču: v 100-150 ml tekočega medija vcepimo 10-15 ml sterilne krvi. To počnejo, ker je v krvi običajno malo mikrobov. Razmerje inokulirane krvi in \u200b\u200bgojišča 1: 10 ni naključno - tako dosežemo redčenje krvi (nerazredčena kri škodljivo vpliva na mikroorganizme). Inokulirane bučke se dajo v termostat. Po enem dnevu (včasih tudi po daljšem času, odvisno od kulture, ki jo je treba izolirati) se vsebina bučk nacepi na posode, da se dobijo izolirane kolonije. Po potrebi setev ponovimo v presledkih 2-3 dni.

Ko iz urina, izpiranja želodca in drugih tekočin izoliramo čisto kulturo, jih predhodno centrifugiramo v aseptičnih pogojih in usedlino nataknemo. Nadaljnja izolacija čiste kulture poteka na običajen način.

Za izolacijo čiste kulture se pogosto uporabljajo izbirni mediji. V številnih metodah za pridobivanje čistih kultur se uporabljajo biološke značilnosti izločenega mikroba. Na primer, pri izolaciji bakterij, ki tvorijo spore, inokulacije segrevamo 10 minut pri 80 ° C in s tem ubijemo vegetativne oblike. Z izolacijo povzročitelja tuberkuloze-j, odpornega na kisline in alkalije, se s pomočjo teh snovi inokulum osvobodi iz spremljajočega materiala! flora. Za izolacijo pnevmokoka in kužne bacile se preučevani material vbrizga belim miši - v njihovem organizmu, ki je zelo občutljiv na te patogene, bi se ti mikro-] razmnožili hitreje kot drugi.

Pri raziskovalnem delu, zlasti pri ustvarjanju; Treba je pridobiti kulture iz ene celice v določeni celici. Takšna kultura se imenuje "klon"] Za njeno pridobitev se najpogosteje uporablja mikromanipulator - naprava, opremljena z instrumenti (igle] pipete) mikroskopskih dimenzij. S pomočjo držala pod nadzorom mikroskopa jih vnesemo v pripravek "B cage drop", potrebno celico (eno) odstranimo in prenesemo v hranilni medij.

Študij izbranih kultur

Študija morfologije, gibljivosti, tinktorskih lastnosti, vzorcev rasti na gojiščih (kulturne lastnosti); encimsko aktivnost in številne druge lastnosti vas! razdeljeni mikrob vam omogoča, da določite njegovo taksonomsko | neko stališče, to je razvrstitev mikroorganizma: op | Določite njegov rod, vrsto, vrsto, podtip, sorto. To se imenuje "identifikacija". Identifikacija mikroorganizmov | mov je zelo pomemben pri diagnosticiranju okužb, viri in poti njegovega prenosa so bili ugotovljeni in v številnih drugih znanstvenih študijah.

PRIDOBITEV ČISTIH RASTLIN.

Čista kultura mikrobov je populacija mikroorganizmov ene vrste, pridobljena iz izolirane mikrobne kolonije. Mikrobiološka kolonija se nanaša na potomce bakterij, ki so posledica razmnoževanja ene mikrobne celice.

Izolacija čiste kulture mikrobov je obvezen korak v kateri koli bakteriološki študiji. Za preučevanje morfoloških, kulturnih, kulturnih, biokemijskih in antigenih lastnosti je potrebna čista kultura, katere celota določa pripadnost preučevanega mikroorganizma vrstam.

Za izolacijo čistih kultur mikrobov iz materialov, ki vsebujejo obilno mešano mikrofloro, so predlagali številne različne metode. Najbolj razširjena metoda mehanskega ločevanja mikroorganizmov, da se dobijo izolirane kolonije na površini ali v globini hranilnega medija. Zelo pogosto se uporabljajo izbirni hranilni mediji, ki spodbujajo razvoj tistih mikroorganizmov, katerih čista kultura naj bi bila izolirana. Nekatere vrste mikrobov so zelo občutljive na nekatere okoljske dejavnike. Posamezna odpornost mikrobov na takšen ali drugačen dejavnik je bila uporabljena za razvoj metod za izolacijo čistih kultur z ubijanjem spremljajoče mikroflore. Ta metoda se uporablja za izolacijo spornih oblik mikrobov, ki so odporne na visoke temperature.

Znano je razmeroma malo metod za izolacijo bakterij kot čistih kultur. To najpogosteje naredimo tako, da posamezne celice izoliramo na trdnih medijih z metodo sejalne proge.

Identične kolonije običajno rastejo iz čiste kulture, mikroskopski pregled pa razkrije podobne celice, zlasti po velikosti in barvi po Gramu. Vendar so možne izjeme, na primer kolonije, ki rastejo iz čiste kulture, so lahko gladke (S) in grobe (R). Poleg tega se v čistih kulturah različnih mikroorganizmov lahko pojavijo kokoidne celice, ciste in spore. Končno nekateri mikroorganizmi kažejo variabilnost gramov.

Sejanje z možgansko kapjo. Obstaja veliko tehnik za črtanje trdih medijskih plošč ("šrafirane plošče"), vendar le redke med njimi skoraj vedno ustvarijo dobro izolirane kolonije, tudi če eksperimentatorjeve sposobnosti niso. Poleg tega lahko razredčene raztopine mešanih kultur nalijemo na površino trdnih medijev v posodah.

Pri delu z anaerobi se "valjene skodelice" ali skodelice s tekočo kulturo, ki se vanj vnesejo v zračno atmosfero, nato inkubirajo v anaerostatu. Za anaerobe so potrebni sveže pripravljeni mediji, proge pa je treba opraviti v prvih 4 urah po avtoklaviranju, da se izognemo kopičenju raztopljenega kisika.

1. Za označevanje na zadnji strani Petrijeve posodice s svinčnikom označite črko T, pri čemer dno razdelite na 3 sektorje.

2. Z zanko s cik-cak kulturo nanesemo poteze na površino agarja v sektorju 1. Za to pokrov plošče najprej dvignemo in takoj po progah takoj zapremo. Zanko steriliziramo v plamenu in pustimo, da se ohladi (15 s).

3. Na površino medija v sektorju 1 narišite zanko in nato takoj nanesite cik-cak poteze na površino medija v sektorju 2. Zanko segrejete v plamenu in pustite, da se ohladi.

4. Na površino medija v sektorju 2 narišite zanko in jo nato s cik-cak potezami nanesite na površino medija v sektorju 3.

5. Inkubirajte nagnjene posode, da kondenzirana voda iz pokrova ne pride na površino agarja. V sektorju 1 raste veliko število kolonij, v sektorjih 2 in 3 pa so ločene dobro izolirane kolonije.

Pridobivanje čiste kulture s presejanjem v globino medija (po Kochu). Tri epruvete, ki vsebujejo 15 ml mezopatamijinega agarja, položimo v vodno kopel, da se agar stopi. Staljeni medij se ohladi na temperaturo 43-45 ° C. V epruveto se vnese ena bakterijska zanka preskusnega materiala. Za boljše mešanje materiala z gojiščem inokulirano epruveto večkrat zasučemo in jo držimo med dlani. Po tem se s kalcinirano in ohlajeno zanko vsebina 1. epruvete prenese v 2. in na enak način iz 2. v 3.. Pripravljene mikrobne razredčitve vlijemo iz epruvet v sterilne Petrijeve posodice, oštevilčene glede na številke epruvet. Ko se medij s preskusnim materialom strdi, posode damo v termostat. Število kolonij na ploščah gojišča se z razredčenjem materiala zmanjša.

Izolacija čiste kulture po metodi Drygalsky. Stopljeni hranilni medij vlijemo v tri petrijevke. Utrjeno okolje je treba posušiti, saj njegova mokra površina prispeva k nastanku združevalne rasti. Ena kapljica preskusnega materiala se vnese v prvo skodelico in s sterilno lopatico podrgne v površino hranilnega medija. Nadalje se lopatica brez izgorevanja skozi lopatico in brez zbiranja novega materiala prenese v drugo in tretjo skodelico, tako da ostane material, ki ostane na njej, drgne na površino hranilnih medijev. Metoda površinskega presejanja, ki jo je predlagal Drygalsky, se najpogosteje uporablja za pridobivanje čiste kulture mikrobov. Namesto lopatke lahko uporabite zanko. Snov na hranilnem gojišču se vzporedno razprostira po celotni posodi v eno smer. Nato po zasuku skodelice za 180 ° narišemo poteze v smeri, pravokotni na prve poteze. Pri tej metodi cepljenja se material na zanki postopoma porablja, izolirane kolonije mikrobov pa rastejo vzdolž mrežastih linij, uporabljenih na koncu inokulacije.

Znano je razmeroma malo metod za izolacijo bakterij kot čistih kultur. To se najpogosteje opravi z izoliranjem posameznih celic na trdnih medijih z uporabo proge ali z vlivanjem majhne količine tekoče kulture ( metoda omejevalnega redčenja). Pridobitev ločene kolonije pa ne zagotavlja vedno čistosti kulture, saj lahko kolonije rastejo ne samo iz posameznih celic, temveč tudi iz njihovih grozdov. Če mikroorganizmi tvorijo sluz, so nanjo pogosto pritrjene tuje oblike. Za čiščenje je bolje uporabiti neselektivni medij (MPA), saj na njem bolje rastejo in jih je lažje zaznati onesnaževalni mikroorganizmi.

Pridobivanje izoliranih kolonij na trdnem hranilnem mediju se doseže bodisi s presejanjem suspenzije mikroorganizmov z lopatico ( kochova metoda) ali z uporabo bakteriološke zanke ( metoda možganske kapi). Zaradi mehanskega ločevanja mikrobnih celic lahko vsaka od njih povzroči izolirano kolonijo ene vrste mikrobov.

Sejanje z lopatico (Kochova metoda) proizvedene v naslednjem zaporedju:

1) kapljico obogatitvene kulture s sterilno pipeto nanesemo na površino hranilnega medija v posodi št. 1 in porazdelimo s sterilno lopatico;

2) lopatico vzamemo ven, skodelico hitro zapremo in lopatico prenesemo v skodelico št. 2, ne da bi jo sterilizirali. Simulirajte porazdelitev kulture po celotni površini medija, tako da se dotaknete njegove površine z isto stranjo lopatke, s katero je bil predhodno razdeljen vzorec;

3) popolnoma enaka dejanja se izvedejo v skodelici št. 3, po kateri se lopatka sterilizira;

4) inokulirane posode damo v termostat in inkubiramo pri optimalni temperaturi.

Po določenem času skodelice odstranimo s termostata in preučimo rast mikroorganizmov. Običajno na plošči št. 1 opazimo neprekinjeno rast bakterij, na naslednjih ploščah pa kolonije.

Presejanje v zanki (metoda izpušnega hoda) vključuje setev bakteriološke zanke iz obogatitvene kulture na površino agarskega medija v petrijevskih posodah. Na prvi stopnji se na vrsto vzporednih potez na agarskem mediju nanese zanka s kulturo (slika 4.2, IN). Zanko steriliziramo, ohladimo na neizdelanem delu agarskega medija in narišemo vrsto potez v smeri, pravokotni na prvo (slika 4.2, B). Nato zanko spet steriliziramo, ohladimo in v smeri nanesemo poteze IN (Slika 4.2), po naslednji sterilizaciji pa v smeri D (Slika 4.2). Skodelice postavimo v termostat in po določenem času se upoštevajo rezultati. Običajno na kapi IN in B raste veliko število kolonij (včasih neprekinjena rast), medtem ko na kapi IN in D nastanejo izolirane kolonije.

Slika 4.2 - Shema progasta bakterija za pridobivanje izoliranih kolonij

Serijske razredčitve v trdnem mediju- najpreprostejša metoda nanosa na posode, ki zajema dejstvo, da po cepljenju vzorca v epruveto s sterilnim stopljenim in ohlajenim agarjem medij premešamo, vlijemo v petrijevko in pustimo, da se strdi. Da dobimo dobro izolirane kolonije, pripravimo vrsto zaporednih desetkratnih razredčitev in v posodo takoj dodamo 1 ml vzorcev, dodamo 15–20 ml stopljenega agarskega medija in zmešamo s stresanjem posode. Včasih so posamezne kolonije potopljene v agar in jih je mogoče odstraniti le mehanično. Slabo je tudi, da so bakterije nekaj časa v okolju pri temperaturi staljenega agarja.

Izolacija čiste kulture

Glavna metoda za izolacijo čistih bakterijskih kultur je metoda, ki jo je predlagal R. Koch, katere princip je pridobivanje kulture bakterij iz izoliranih kolonij. Ko izoliramo čisto kulturo aerobov, se obogatitvena kultura ali preskusni material poseje na gosto hranilno gojišče. Vrstni red dela je naslednji. Staljeni gojišče gojijo v sterilne Petrijeve posodice. Ko se medij strdi, na njegovo površino nanesemo kapljico preskusnega materiala in kapljico porazdelimo s sterilno lopatico Drygalsky, najprej na eno stran površine hranilnega medija v petrijevki, nato na drugo. Z isto lopatico obrišite površino gostega medija v 2., 3. in 4. skodelici. Jedi inkubiramo pri optimalni temperaturi za mikrobe (najpogosteje 37 ° C) do 2 dni. Običajno v prvih dveh jedeh po inkubaciji opazimo nenehno rast mikrobov, v naslednjih pa izolirane kolonije.

Kulturo razprševanja lahko izvedemo z metodo redčenja. V tem primeru se obogatitvena kultura ali njeno redčenje odvzame z zanko in na gostem hranilnem mediju v Petrijevi posodi v določenem vrstnem redu narišejo poteze. Zanko steriliziramo pred vsako novo potezo. Skodelice inkubiramo 1-7 dni, odvisno od hitrosti rasti mikroorganizma. Gojene izolirane kolonije se v zanki nanesejo v epruvete na površini poševnice ali v tekočem mediju.

Izolirane kolonije anaerobov in fakultativnih anaerobov dobimo s potopljeno inokulacijo. V ta namen se v epruvete inokulira 0,5–1,0 ml razredčitve preskusnega materiala s stopljenim hranilnim medijem, ohlajenim na 40–37 ° C, da dobimo izolirane kolonije. Medij se hitro ohladi in površina je prekrita s plastjo sterilne mešanice parafina in tekočega parafina. Uporabite lahko Pasterove kapilarne pipete, v katerih je primerno razredčeno agarsko gojišče z inokulacijo. Konec kapilare je zatesnjen. Z dobro izbrano razredčitvijo izolirane kolonije rastejo v epruveti ali pipeti. Da bi jih odstranili, epruveto (ali pipeto) rahlo segrejemo s hitrim vrtenjem nad plamenom gorilnika ali hitrim potapljanjem v toplo vodo, medtem ko se agar ob steni stopi in vsebina kolone zlahka zdrsne v sterilno petrijevko. Stolček agarja razrežemo s sterilnim skalpelom in kolonije odstranimo tako, da jih zajamemo s sterilno kapilarno pipeto ali zanko. Predelane kolonije se prenesejo v tekoči medij, ugoden za razvoj izločenih mikroorganizmov. Če dobimo izolirane kolonije v kapilari, jo po temeljiti dezinfekciji razbijemo s sterilno pinceto in kapilarne odseke, ki vsebujejo izolirane kolonije, prenesemo v sterilni medij.

Določanje čistosti izolirane kulture

Čistost kolonij, zasejanih na poševnem agarju, je mogoče preveriti na več načinov: vizualno, kontrolo pod mikroskopom in nanašanje na številne hranilne medije. Z vizualnim nadzorom opazimo rast mikroorganizmov vzdolž črte na površini poševnega hranilnega medija. Če rast vzdolž kapi ni enakomerna, se šteje, da je kultura onesnažena. Vendar je tak nadzor mogoč le za pridelke, ki lahko rastejo na površini trdnih hranilnih medijev. Zato je treba čistost kulture spremljati pod mikroskopom. Za to se pripravi pripravek iz obarvanih celic, ki se gleda s potopitvijo. Čista kultura mora biti morfološko homogena in ima lahko le majhne razlike v velikosti celic.

Določitev sistematičnega položaja bakterij vključuje preučevanje vrste lastnosti: morfoloških, kulturnih in fiziološko-biokemičnih.

Kulturne lastnosti

Kulturne ali makromorfološke lastnosti vključujejo značilnosti rasti mikroorganizmov na trdnih in tekočih hranilnih medijih.

Rast na trdnih hranilnih gojiščih.

Na površini gostih hranilnih medijev lahko mikrobi rastejo v obliki kolonij, proge ali neprekinjene zelenice. Kolonija je izolirana zbirka celic iste vrste, ki je v večini primerov zrasla iz ene same celice. Glede na to, kje so se celice razvile, obstajajo površinske, globoke in spodnje kolonije. Kolonije, ki rastejo na površini okolja, so zelo raznolike. Pri njihovem opisovanju se upoštevajo naslednje značilnosti:

oblika kolonije - zaokrožene, amebe, nepravilne, rizoidne itd .;

površina kolonije - gladka, hrapava, žlebljena, zložena, nagubana, radialno progasta, s koncentričnimi krogi;

profil kolonije - ravna, konveksna, v obliki kraterja, stožčasta, v sredini izbočena z grebenom ob robu, v sredini vdrtim, z grebenom ob robu itd .;

sijaj in prosojnost - sijoča, mat, dolgočasna, mokasta, prozorna;

barva kolonije - brezbarvne (sivobele kolonije se imenujejo brezbarvne) ali pigmentirane - bele, rumene, zlate, oranžne, lila, rdeče, črne. Posebej upoštevajte sproščanje pigmenta v podlago;

rob kolonije - gladke, valovite, zobate, resaste, zožene itd .;

struktura kolonije - enakomerna, drobnozrnata in grobozrnata, progasta (rob in struktura kolonije se določi z lupo ali pri majhni povečavi mikroskopa);

konsistenca kolonije - določi se tako, da se kolonije dotakne z zanko. Kolonijo je mogoče enostavno odstraniti iz agarja, biti gosta, mehka, prerašča v agar, sluzna (drži se zanke), žilava, filmska (odstranjena v celoti), krhka.

Globoke kolonije so precej monotone. Najpogosteje so videti kot sploščena leča, v projekciji imajo obliko ovalov s koničastimi konci. Kolonije nekaj bakterij so v sredo podobne pramenom vate z nitnatimi izrastki. Tvorbo globokih kolonij pogosto spremlja ruptura gostega medija, če mikrobi tvorijo pline. Spodnje kolonije najrazličnejših mikroorganizmov imajo obliko tankih prozornih filmov, ki se širijo po dnu.

Velikosti in nekateri drugi znaki kolonij se s starostjo spreminjajo in so odvisni od sestave medija, zato so pri njihovem opisovanju prikazani starost kulture, sestava medija in temperatura gojenja.

Ko opisujemo rast mikroorganizma z možgansko kapjo, opazimo naslednje značilnosti: rast je pičla, zmerna ali obilna, neprekinjena z enakomernim ali valovitim robom, dobro vidna, podobna verigam osamljenih kolonij, razpršena, pernata, drevesna ali rizoidna. Karakterizirajo optične lastnosti plošče, njeno barvo, površino in konsistenco.

Rast na tekočih hranilnih gojiščih.

Na tekočih hranilnih medijih obstajajo naslednje oblike rasti bakterij:

Zameglitev okolja... Takšna rast je značilna za številne patogene mikrobe, ki spadajo v skupino fakultativnih anaerobov.

Spodnja rast... Zanj je značilno nastajanje usedlin na dnu epruvete. Lahko so redke ali obilne, drobne, homogene, vlaknaste ali velike, ohlapne kosmiče. Konzistenca usedline je lahko viskozna, sluzasta, krhka ali pastozna. Če kultura ne tvori pigmenta, se barva medija ne spremeni in usedlina postane sivkasto bela ali rumenkasta. Rast na dnu je značilna za bakterije z anaerobnim dihanjem.

Rast stene bakterija se izraža v tem, da gojišče v epruveti ostane prozorno. Bakterije rastejo v obliki velikih, ohlapnih kosmičev ali strnjenih zrn, pritrjenih na notranji površini sten cevi.

Površinska rast za bakterije je značilen videz filma na površini tekočega hranilnega medija. Film je lahko tanek, brezbarven, ob tresenju ali vznemirjanju izgine, moker, viskozen, sluzast, gost, suh; pri odvzemu materiala ga lahko v celoti odstranimo v obliki okroglega diska. Pogosto rast mikroorganizmov v tekočem hranilnem mediju spremlja videz plina in vonja.