Bakteriologik usulning ikkinchi bosqichining maqsadi: mikroorganizmlarning sof madaniyatini va uning to'planishi. Buning uchun harakat qilish:

· Mustamlakalarning makroskopik o'rganish va yorug'lik, shaklning o'lchamlari, shakllari, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga, konturiga xos bo'lgan yorug'lik (o'lchamlari xarakterini aks ettiradi.

Exolyatsiya qilingan koloniyalarni mikroskopik tekshirish, so'ngra ushbu koloniyalardan smearlarni tayyorlang va tomosha qiling.

Sof madaniyat yoki rejalashtirilgan media va o'quv media va optimal sharoitlarda ishlab chiqarish muhiti va inkubatsiyalar uchun xos bo'lgan ekologik.

Mikroblarning madaniy alomatlari ozuqaviy vositalarda ularning o'sishining xususiyatlari bilan belgilanadi. Doimiy bo'lish, har bir mikrob uchun ular muhim diagnostika belgisidir.

Mikroorganizmning toza madaniyatiga ega bo'lish, diqqatni mikrob o'sishi tabiati uchun to'lanishi kerak, i.e. Madaniyat belgilardan biri sifatida mikroorganizm turini aniqlashga imkon beradigan belgilardan biri sifatida xususiyatlar mavjud. Suyuq muhitda mikrobani rivojlantirganda, siz bakteriyalarning o'sishini shaklda ko'rishingiz mumkin:

a) diffuz buzilish;

b) shaffof muhitda pastki va kesish;

c) yuzaki plyonka;

d) "miska vat".

Yarim suyuq muhitda siz tomosha qilishingiz mumkin:

a) Xaridorni (ko'chmanchi bakteriyalar) ekish atrofida tarqalish;

b) in'ektsiya jarayonida o'sish (belgilangan bakteriyalar);

v) gaz pufakchalarini o'rta yoki shakllantirishning yorilishi.

Zich muhitlarda kuzatiladi:

a) yakka koloniyalarning o'sishi;

b) qattiq reydning o'sishi.

Zich ozuqa vositasida mikroblarning o'sishi. Koloniyalarning xususiyatlarini o'rganish uchun petri taomlarida zich ozuqa moddalari anjomlari bilan birga rivojlanadi. O'simda, materiallar koloniyalarning alohida o'sishini olishga harakat qilmoqda.

Koloniyalarning tabiati bilan quyidagi turlar ajratiladi:

Serves turi (ingliz tilida silliq - silliq) - koloniyalar yumaloq va konveks shakli, silliq sirt, namlik izchilligi bilan ajralib turadi;

· R -YYTH (ingliz tilidan. Tugsiz - Grungy) koloniyalar qo'pol sirt, tartibsiz qirralar, quruq mahkamlash bilan ajralib turadi. Ular mutatsiyalar natijasida ular silliq s -formdan shakllanadilar. R shaklidagi tarqalishning o'zgarishi dispansent davrida kuzatiladi. Terogenik mikroblarda tarqoqlik hodisasi antibiotik va kimyoterapiya ta'sirida, yuqumli jarayon davomida, shuningdek, tashqi muhit omillari, shuningdek, tashqi muhit omillari.

Ushbu ikkita asosiy turdagi koloniyalarga qo'shimcha ravishda m tipidagi shilliq qavat (yaproq shilimshiq shilliq qavatdan), qattiq shilliq qavatning mustahkamligi bilan tavsiflanadi. U bakterial ekinlarni tarqalish jarayonida shakllanadi.

Har bir turdagi bakteriyalar koloniyalarni turli xil xususiyatlarga ega. Ularning belgilari yalang'och ko'z tomonidan olib borilgan va yorug'lik aks ettirilgan, shuningdek, katta kattalashtirish bilan kattalashtirilgan shisha yoki mikroskop bilan o'rganiladi. Tadqiqot boshida stakan pastki qismini o'zlariga aylantiradi va uzatiladigan yorug'likdagi stakanlarni ko'rib chiqadi. Agar turli xil koloniyalar bo'lsa, ularning har biri raqamlangan va alohida tasvirlangan. Protokol quyidagi xususiyatlarga e'tibor beradi.

1. Koloniyalarning kattaligi U diametri (katta - diametri 4-6 mm va undan ko'p diametri bilan, o'rta - 1-2 mm va nuqtada 1 mm dan kam).

2. koloniyalar shakli (To'g'ri yumaloq, noto'g'ri, noto'g'ri, noto'g'ri, rizoid - daraxtlarning turli xil ildizlarini eslatadi).

3. Shaffoflik darajasi (noaniq, shaffof, shaffof).

4. mustamlaka tuzilishi. Tuzilishning xususiyatiga ko'ra, mustamlakalarning quyidagi turlari ajratib turadi:

· Xeyalin - rangsiz, shaffof, ko'rinadigan aniqlangan tuzilmasdan;

Donalarga qarab, donalarga qarab, qo'pol ravishda parchalanib ketgan bo'lib;

Koloniyaning qalinligidagi uzun, zich yopilgan iplar mavjudligi bilan ajralib turadigan fits shaklidagi yoki tolali. Koloniyalar bir hil va bema'ni. Birinchisining tuzilishi har xil qismlarda bir xil bo'lib, ikkinchi markaziy qism periferik yoki individual tarmoqlardan massaning qolgan qismi bilan teng bo'lmagan strukturaga ega.

5. rang koloniyasi Mikrobial madaniyatni keltirib chiqaradigan pigment tomonidan aniqlanadi. Patogen bakteriya pigmentining asosiy qismi, ularning koloniyalari rangsiz yoki suutiruvchan ranglar, opalga o'xshash rangsiz yoki suutiruvchan rangga ega. Transport uzatilgan yorug'likda bunday koloniyalar ko'proq yoki kamroq shaffofdir. Mikroblarning pigment hosil qiluvchi turlari turli xil rangdagi koloniyalarni beradi: qaymoq, sariq, oltin, qizil, qizil, lilak, qora va boshqalar.

6. sirt xususiyati (qo'pol, porloq, mot, quruq, nam, silliq, radiostrial yoki konsentrik ishlov beriladi).

7. EDGE konturining tabiati. Yaxshi e'lon qilingan va notekis shaklida silliq qirralar mavjud. Ikkinchisi bo'lingan:

Katta shakldagi ozgina yumaloq yoki tekislangan tishli va tekislangan festieston viloyati;

· To'lqinli chekka, bu katta tishlar loyqa ekishidan biroz farq qiladigan to'lqin;

Erashin yoki Juda, turli o'lchamdagi va shakllarning o'tkir tishlaridan iborat edi;

Pishirilgan chekka Villi bor edi. Ba'zi hollarda, aniq bayon qilingan chiziq, o'rtadagi koloniyaning buzilishi yo'q. Koloniyaning bu chekkasi noaniq deb ataladi.

8. yengillik Bu uni ozuqa moddalari va vertikal qismdagi konturlar aylanmasining ustidagi ko'tarish bilan tavsiflanadi. Relyef - konveks, qo'shimcha, tekis, konus shaklidagi, gumbaz, konus shaklidagi zich joylashgan va boshqalarni qalinlashtirilgan qirralari va boshqa narsalar bilan konveks konvektdir.

9. Kolonki muvofiqlikUning jismoniy holatini aniqlash, bakterial tizzaning bakteriologik tomchining bakteriologik tomkining bir qismini qo'llash yoki olish orqali tergov qilinadi. Koloniyaning izchilligi tabiati bilan:

Sofi, osongina olib tashlangan va sariyog 'kabi ozuqaviy vositaning sirtida xiralashgan;

· Yopishtiruvchi yoki shilliq pardalar yopish va halqa uchun cho'zish

Koloniyaning kattaligi va shakliga mos keladigan elastik plyonka shaklida oziklik plyonkasi shaklida ozuqaviy vositalar siridan olib tashlangan tolali yoki teri.

Fametrli, quruq, sochilganida sochilib ketdi.

Bakteriyalarning ayrim turlarining koloniyalari ozakteriya muhitining qalinligida o'sib bormoqda, bu bakteriologik pastadir bilan ham belgilanadi.

10. hid - koloniyalarning unchalik muhim belgisi, chunki ular sabab bo'lgan birlashmalar subyektivdir. Oziq-ovqat vositalarining o'sishi jarayonida bakteriyalarning ko'plab turlari ma'lum aromatik moddalar bilan ajralib turadi. Xususan, kino tayoqlarining madaniyati karamel hidiga, qatlamlar madaniyati - Sutin Sumum, Fiker - Fakeli er, oqsili - bu chirigan hiddir.

III. Amaliy ish rejasi

1. MPAda o'sgan koloniyalarning madaniy xususiyatlarini o'rganish (oldingi darsda qilingan ekinlarni ko'rish)

2. Sharedce Atrof-muhitga (shivirlangan MPA) kesish uchun ajratilgan koloniya (sof madaniyat)

3. Har xil bakteriyalarning sodda va murakkab ozuqalarda o'sish xususiyatini tekshiring va o'rganing

4. Jadvalni "nafas turlari bilan mikroorganizmlarning tasnifi" ni to'ldiring

5. Vaziyatli vazifalarni hal qilish

Bakteriologik tadqiqotlarning muhim bosqichi pasayadi. Tadqiqotning maqsadi, ekish materialining tabiati va o'rta ishlatiladigan ekish usullari. Ularning barchasi majburiy maqsadni o'z ichiga oladi: xorijiy mikroblardan PS xizmatlarini himoya qilish. Shuning uchun tezda ishlash kerak, ammo isitiladigan * havo kuchayadigan o'tkir harakatsiz. Ekinlar davomida gapirishning iloji yo'q. Ekish eng yaxshi boksda amalga oshiriladi (yuqumli materiallar bilan ishlashda, shaxsiy xavfsizlik qoidalarini amalga oshirish kerak).

Sof madaniyatni buzish bosqichlari:

1-kun - izolyatsiya qilingan koloniyalarni olish. Tadqiq qilingan pastadir materiallari, papak yoki shisha tayoqlar ostidagi kassa petri taomining tekisligida qo'llaniladi. Shak-i Telem materialni o'rtadan o'rta joyga ishqaladi; Spatulani va 3-chashkada ekilgan spatulani varaqasini buzmang. 1-chi stakanning bunday ekinlari bilan juda ko'p materiallar mavjud va shunga mos ravishda, ko'plab mikroblar, 2-chi kamroq va 3-chi undan ham kam.

Siz ko'cha ekish paytida ajratilgan koloniyalarni olishingiz mumkin. Buning uchun o'rganilayotgan material bulon yoki izotonik natriy xlorid eritmasi emul qilinadi.

2-kuni - krujkalardagi mikroblarning o'sishini o'rganing. 1-chi stakanda, odatda doimiy o'sishdir - ajratilgan koloniyada ajralib turmaydi. Agara yuzasida 2 va 3-chashka, yakkalanib koloniyalar o'sib bormoqda. Ular yalang'och ko'z bilan, kattalashtirilgan shisha bilan, mikroskopning kichik o'sishi va ba'zan steroskopik mikroskopda. Kerakli koloniya kubokning pastki qismida nishonlanadi va Bazed Atarga qaytib ketdi. Ekmerda ekish. (Siz faqat alohida koloniyalarni qayta tiklashingiz mumkin.)

3-kuni - o'zgaruvchan o'spirinning o'sishini o'rganing. Smearing, bo'yab qo'ying va madaniyat toza ekanligiga ishonch hosil qiling, uni o'rganishga harakat qiling. Shu bilan birga, sof madaniyatni tanlash tugaydi. Muayyan manbadan va o'rganilgan madaniyatdan bag'ishlangan "Strikin" deb nomlanadi.

Toza madaniyat izolyatsiya qilinganda (gemosbulum-turlar), u suyuq muhitda "kuchliroq" degani: 10-15 ml steril qon steril qonida 100-150 ml suyuq muhitda urug'lanadi. Shunday qilib, qonda odatda kam miqdordagi mikroblar mavjud. Qon va ozuqaviy o'rtada ekish nisbati bejiz emas - qonni suyultirishga erishish (qonsiz qon mikroorganizmlarga zararli ta'sir ko'rsatadi). Termostat kiygan shisha. Bir kundan keyin (ba'zan aholi madaniyatiga qarab) klakning tarkibidan, kosalarning urug'lari izolyali koloniyalarni olish uchun qilingan. Agar kerak bo'lsa, ular 2-3 kunlik intervallarda ekishni takrorlaydilar.

Toza madaniyat siydikdan, oshqozon va boshqa suyuqliklarning yuvish suvi, ular aseptik sharoit va cho'kindi urug'larga kiritilgan. Keyinchalik toza madaniyatni taqsimlash odatiy tarzda ishlab chiqariladi.

Tanlangan ommaviy axborot vositalarida toza madaniyatni chiqarish uchun keng qo'llaniladi. Bir qator usullarda mikrobning biologik xususiyatlari toza ekinlarni olish uchun ishlatiladi. Masalan, ekinlarning kamchiliklarini shakllantirish paytida 10 daqiqa 80 ° C da isitiladi, bu vektitsion shakllarni o'ldiradi. Ushbu tomirlarning yordami bilan sil kasalligi-jin va ishqorlarga keltirilgan qo'zg'olon vositasi, urug'lantirilgan materiallar bog'liqligidan ozoddir! Flora. Tadqiqotning pnevmomoccus va 1 ta popirchik moddalarni chiqarish uchun oq sichqonlar uchun - ularning organizmlariga bu mikroga nisbatan yuqori darajada ko'paytiriladi.

Tadqiqot ishlarida, ayniqsa gen ostida; Davolash, xuddi shu hujayradan 1-bosqich madaniyatlarni olish kerak. Bunday madaniyat "klon" deb ataladi. Ko'pincha bu juda tez-tez mikrosmonlivule vositalari (igralani] asboblari) yordamida mikroskopik o'lchamlar bilan jihozlangan asbobga ishlating. Der-J yordami bilan ular mikroskopni boshqarish bilan in'ektsiya qilinadi, ular "B porlagan tomchi" preparatiga kiritiladi, kerakli kamerani (bitta) olib tashlaydi va uni ozuqaviy moddalar vositasiga o'tkazing.

Belgilangan ekinlarni o'rganish

Media (madaniyat xususiyatlariga) morfologiya, harakatchanlik, tinnologiya xususiyatlari, o'sish belgilarini o'rganish; Fermentat faolligi va boshqa bir nechta xususiyatlar! Bo'lingan Mikrob uni taksonomlashtirishga imkon beradi Kontak, ya'ni mikroorganizmni tasniflang: Op | Uni engillashtiring, turini ko'ring, tur, pastki qism, xilma-xillik. Bu "identifikatsiyalash" deb nomlanadi. Mikroorganisni aniqlash | Harakat infektsiyalarni tashxislashda juda muhimdir, uni o'tkazishni manbalar va boshqa bir qator ilmiy va nomzodlar tashkil etadi.

Toza ekinlarni olish.

Mikroblarning sof madaniyati alohida mikrob koloniyadan olingan bir turdagi mikroorganizmlar aholisi deb ataladi. Mikrobial koloniya ostida bitta mikrob hujayraning ko'payishidan kelib chiqadigan bakteriyalarning naslini anglatadi.

Mikroblarning sof madaniyatini tanlash har qanday bakteriologik tadqiqotlar majburiy bosqichi hisoblanadi. Toza madaniyat mikroorganizmning fikricha rivojlanishining turini aniqlaydigan morfologik, madaniy, bitikiy va antiguziy xususiyatlarni o'rganish uchun zarurdir.

Mo'l-ko'l aralash mikroflorani o'z ichiga olgan materiallardan toza mikrobial ekinlarni chiqarish taklif etiladi. Eng katta taqsimot keldi mikroorganizmlarni mexanik ajratish usuli, materialda, sirtli koloniyalarni er yuzidagi yoki ozuqaviy vositalarda iste'mol qilinadigan koloniyalarni olish uchun. Ushbu mikroorganizmlarning rivojlanishini rag'batlantiruvchi ozuqaviy media, sof madaniyat ajratilishi kerak. Ba'zi mikroblarning ayrim turlari ma'lum ekologik omillarning ta'siriga yuqori sezgirlikka ega. Bir yoki boshqa omillarga mikroblarning inventsiyasi, bir yoki birlashtirilgan mikroflorani o'ldirish orqali toza ekinlarni chiqarishni rivojlantirish usullarini ishlab chiqish uchun ishlatilgan. Ushbu usul yuqori haroratga chidamli mikroblarning shakllari bilan ajralib turadi.

Bakteriyalarni pure ekinlari shaklida ajratish uchun nisbatan kam bir oz usullar ma'lum. Ko'pincha, bu insult usulidan foydalangan holda qattiq ozuqaviy vositada individual normal hujayralarni izolyatsiya qilish orqali amalga oshiriladi.

Sof madaniyatdan, odatda, xuddi shu koloniyalar odatda mikroskopatsiya paytida, xususan, gramm miqyosda va bo'yash paytida aniqlanadi. Biroq, bundan mustasno, bundan mustasno, toza madaniyatdan o'sgan koloniyalar silliq (lar) va qo'pol (r) bo'lishi mumkin. Bundan tashqari, xujumlangan hujayralar, kistalar va tortishuvlar turli mikroorganizmlarning sof madaniyatlarida paydo bo'lishi mumkin. Nihoyat, ba'zi mikroorganizmlar gramvarani namoyon etishadi.

Insultni ekish. Bir stakan qattiq atrof-muhitga ("urilgan stakanlar" bilan urishning ko'plab usullari mavjud, ammo ulardan faqat ba'zilari tajriba bo'lmagan holda ham yaxshi izolyatsiya qilingan koloniyalarni berishadi. Bundan tashqari, aralash madaniyatning stakan yuzasida suyultirilgan madaniyat eritmalarini quyish mumkin.

Anaeroblar bilan "urilgan stakanlar" yoki havo muhitida suyuqlik bilan shug'ullanadigan suyuqlik bilan ishlaganda, keyin anaerostate bilan. Yangi tayyorlangan ommaviy axborot vositalarida "Anerobov" uchun kerak bo'lgan dastlabki 4 soatdan keyin eritilgan kislorodni to'plashdan saqlanish uchun dastlabki 4 soat ichida amalga oshirilishi kerak.

1. Petri Petri teskari tomonini markalash uchun T harfi 3 sektorning pastki qismini ajratib turadi.

2. Shkafli shkaf bilan halqalar buyumning yuzasida zarbalar. Buning uchun stakan qopqog'i avval ko'tariladi va insultni darhol yopib qo'ydi. Loop alangada sterilizatsiya qilinadi va sovushini sovutish uchun bering (15 s).

3. 1-sektorning o'rtadagi o'rtadagi er yuzi ustidagi bo'shatlarni olib, sektorning o'rtadagi o'rtalarida zigzagni qo'llang.

4. 2-sektorning o'rtadagi o'rtadagi muhit yuzasida tizzani olib, 3 sektorning er yuzasida qo'llang.

5. Qopqoqdan suvni konditing suvi uchun torting, agar askar yuzasiga tegmadim. 1-sohada ko'plab koloniyalar o'sib bormoqda, hollarda tarmoqlarda 2 va 3 ta alohida yaxshi yaxshi izolyatsiya qilingan koloniyalar paydo bo'ladi.

Turar joyning er qa'rida (KORXda) rezidentning qiymati bo'yicha tozalash madaniyatini olish. 15 ml go'shtni o'z ichiga olgan uchta naychani qo'lda tutashgani uchun suv hammomiga solib qo'ydi. Eritilgan muhit 43-45 ° C haroratga sovutiladi. Tadqiqot ostida materialning bir bakterial singasi naychaga olib kelinadi. Mutaxassisni o'rta, statistika naycha bilan yaxshiroq aralashtirish uchun kaftlar orasidagi yopilishni bir necha marta aylang. Shundan so'ng, kaltaklangan va sovuq pastadir, 1-sinov naychasining tarkibi 2-chi va 2-chi. Mikroblarning tayyorlangan kasalligi naychalardan quvvati steril stakanlariga quyiladi va naychalar soniga mos keladigan raqamlar bilan ko'rsatilgan. O'rta chaqnashdan keyin stakanlarning o'rganilgan materiallari termostat ichiga joylashtiriladi. Moddiy narsalarning ozuqalari bo'lgan stakanlardagi koloniyalar soni kamayadi.

Sof madaniyatni Draganskiy usuli bilan izolyatsiyasi. Eritilgan ozuqa moddasi uch stakan Petri shahrida to'kilgan. Muzlatilgan muhit majburiydir, chunki uning nam sirti o'sishni rivojlantirishning shakllanishiga yordam beradi. Birinchi kubokda, o'qish paytida bir tomchi va steril spatula uni ozuqaviy moddalar vositasi yuzasiga ishqalash. Keyinchalik, spatulani yoqmasdan va yangi materialni olmasdan, spatula ikkinchi va uchinchi stakanlarga o'tkazilib, uni ozuqa moddalarining ozuqaviy media yuzasiga surting. Dragan tomonidan taklif qilingan yuzadagi olib tashlash usuli mikroblarning toza madaniyatini olish uchun eng keng tarqalgan. Spatula o'rniga siz ko'chadan foydalanishingiz mumkin. Oziq-ovqat vositalari bo'yicha material bir yo'nalishda kubok bo'ylab parallel chiziqlar bilan taqsimlanadi. Keyin, kubokni 180 ° ga burib, teginish birinchi zarbalarga perpendikulyar yo'nalishda amalga oshiriladi. Ushbu ekish usuli bilan, pastadirdagi material asta-sekin iste'mol qilinadi va ekish paytida qo'llaniladigan panjara chiziqlarida alohida mikroblar oshadi.

Bakteriyalarni pure ekinlari shaklida ajratish uchun nisbatan kam bir oz usullar ma'lum. Ko'pincha, bu oz miqdordagi suyuqlik stakanidagi insult yoki to'kilgan suvni ishlatadigan qattiq ozuqaviy vositada alohida ozuqaviy vositalardan ajratish orqali amalga oshiriladi ( chekishni cheklash usuli). Biroq, alohida koloniya olish har doim madaniyatning pokligini kafolatlay olmaydi, chunki koloniyalar nafaqat individual hujayralar, balki ularning klasterlaridan ham o'sishi mumkin. Agar mikroorganizmlar shilliqni hosil qilsa, unga ruxsatsiz shakllar biriktirilgan. Tozalash uchun, tanlanmaydigan vosita (MPA) dan foydalanish afzalroq, chunki ifloslantiruvchi mikroorganizmlarni ko'paytirish yaxshiroqdir va ularni aniqlash osonroq.

Qattiq ozuqaviy vositada izolyatsiya qilingan koloniyalarni olish mikroorganizmlarning suspenziyasi bilan supurula bilan ( koha usuli) yoki bakteriologik pastadek yordamida ( chiqib ketgan insult usuli). Mikroorganizm hujayralarining mexanik jihatdan kelishmovchiliklari natijasida ularning har biri bitta turdagi mikroblarning alohida koloniyasini ishga tushirilishi mumkin.

Rasshe Spatula (Koch usuli) quyidagi ketma-ketlikda ishlab chiqarilgan:

1) 1-sonli bir stakan ichidagi ozuqaviy vosita yuzasida bir tomchi küyarülent madaniyati bilan steril pietal va uni steril spatula bilan taqsimlanadi;

2) Boduq olinadi, kosa tezda yopiladi va spatulani sterilizatsiya qilmaydi. O'rta yuzasida madaniyatning butun yuzasida madaniyatni taqsimlashni taqlid qilib, ilgari namunani tarqatgan spatulaning bir tomoniga tegizish;

3) xuddi shu harakatlar 3-raqamli kubokda amalga oshiriladi, shundan so'ng spatula sterilizatsiya qilinadi;

4) Soqokli stakan termostat ichiga joylashtiriladi va tegmaslik haroratda inkubatsiya qilinadi.

Muayyan vaqtdan so'ng, stakan termostatdan olingan va mikroorganizmlarning o'sishini o'rganadi. Odatda 1-raqamli kubokda bakteriyalarning doimiy o'sishi kuzatilmoqda, koloniyalar keyingi kuboklarda nishonlanadi.

Russev halqa (urish usuli) Bu petri taomlarida Bakteriologik tomkni ekish madaniyatidan jami madaniyatdan ekish oladi. Saylovning birinchi bosqichida, agar madaniyatli bir qator parallel chiziqlar qo'llaniladi (4.2-rasm, Lekin). Sterilizatsiya sterilizatsiya qilinadi, agar asrangning nochor qismi haqida salqin bo'lib, birinchi tomonga perpendikulyar yo'nalishda bir qator zarba bering (4.2-rasm, B.). Keyin halqa yana sterilizatsiya qilinadi, zarang sovutiladi va chiziqlar yo'nalishda qo'llaniladi Ichida (4.2-rasm) va boshqa sterilizatsiya qilingandan so'ng - yo'nalishda G. (4.2-rasm). Kuboklar termostatga joylashtiriladi va ma'lum vaqtdan keyin natijalarni hisobga oling. Odatda stokda Lekin va B. Juda ko'p sonli koloniyalar (ba'zan doimiy o'sish), shlyapalarda Ichida va G. Shakllantirilgan koloniyalar.

4.2-rasm - izolyali koloniyalarni qabul qilish uchun bakteriyalar sxemasi

Qattiq muhitda ketma-ket xotirjamlik- Steril eritilgan va sovutishdan keyin namunani sinashdan keyin stakanlarni ekishning eng oson usuli, vosita qo'zg'aladi, petri idishga quyiladi va muzlatib qo'yadi. Yaxshi ajratilgan koloniyalarni olish uchun bir qator ketma-ket o'n karra semirishlar tayyorlanadi va 1 ml namuna darhol bir stakanga olib kelinadi, 15-20 mlli eritilgan tupurish, bir stakan qo'shilib, aralashtiriladi. Ba'zida individual mustamlakalar agar uni mexanik ravishda olib tashlash mumkin. Yomon va bu bakteriyalar eritilgan tup haroratida joylashgan.

Sof madaniyatni tanlash

Bakteriyalar pakteriyalarining izolyatsiyasining asosiy usuli bu R.Sh. Kabi tomonidan taklif etilgan usul bo'lib, uning printsipi izolyatsiya qilingan koloniyalardan bakteriyalar madaniyatini olishdir. Aeroblar toza madaniyati isrof qilinganida, jami madaniyat yoki tadqiqotda material zich ozuqa vositasiga ekilgan. Keyingi uchun protsedura. Eritilgan ozuqaviy vositalar steril petli idishlarga quyiladi. O'rta muzlatilgandan so'ng, u bir tomchi materialni o'rganishda qo'llaniladi va Dragnalskiy Spatula Petri kubogidagi ozuqa moddalarining bir tomonida, keyin ikkinchi. 2-chi, 3-chi va 4-chi kubokning zich muhitining yuzasi bir xil spatulani artdi. Kuboklar mikroblar uchun maqbul harorat (ko'pincha - 37 ° C) 2 kundan 2 kungacha inkubatsiya qilinadi. Odatda inkubatsiyadan keyin dastlabki ikki stakanda mikroblarning qattiq o'sishi kuzatiladi, keyingi yakkama-yakka koloniyalarda.

Siz to'plangan qon tomir usuli bilan jamg'aruvchan madaniyatni yo'q qilishingiz mumkin. Bunday holda, jamg'aruvchan madaniyat yoki uning naslini hal qilish bilan olib boriladi va ma'lum bir tartibda Petri kubogida zich ozuqa moddasi bo'ylab zarba beradi. Har bir yangi zarbadan oldin sterilizatsiya qiling. Kubok mikroorganizmning o'sish sur'atlariga qarab 1-7 kunlik termostratsiya qilinadi. O'sishli koloniyalar inchleyning usuli bilan o'ralgan yoki suyuq muhitning yuzasida sinov naychalarida sekundlardagi halqalarni sekundigor qoplaydi.

Anaeroblarning izolyali koloniyalari va ixtiyoriy anaeroblar chuqur ekish usuli bilan olinadi. Shu maqsadda, eritilgan ozuta moddalari bilan sinov naychalarida 40-37 ° C gacha sovutiladi, masalan, bunday hisoblab chiqilgan materialni inkassaytalashtirilgan koloniyalarni olish uchun ekilgan. O'rta tezda sovutadi va sirtni kerilizatsiya va vazelin moyining steril aralashmasi bilan quyadi. Paster kapillyaryariya puetesidan foydalanish mumkin, unda ekish bilan mos keladigan vositaning mos keladigan naslini oshirish. Kapillyarning oxiri qidirilmoqda. Sinov naychasida yoki pipetal koloniyalarda muvaffaqiyatli suyultirish bilan. Ularni olib tashlash uchun sinov naychasini (yoki piket) tezda aylantiriladi, u bilan yaqinda suvda tezda aylanadi, devorga tutashadi va ustunning tarkibi esa steril stakanga osonlikcha siljiydi petri. Agar ustuni steril skalpel tomonidan kesilib, steril kapillyarial pipet yoki pastadirni ushlash, koloniyalarni olib tashlaydi. Olingan koloniyalar ajratilgan mikroorganizmlarni rivojlantirish uchun berilgan suyuq o'rtaga o'tkaziladi. Agar izolyatsiya qilingan koloniyalar kapillyarda olinsa, ehtiyotkorlik bilan dezinfektsiyadan so'ng, izolyarli koloniyalarni o'z ichiga olgan kapillyarning steril twezi va kapillyarining tarkibi bilan tozalanadi.

Tanlangan madaniyatning pokligini aniqlash

Qiyin tarkibiga ajratilgan koloniyalarning tozaligi bir necha jihatdan sinovdan o'tkazilishi mumkin: vizual, mikroskop va bir qator ozuqaviy vositalarning kengaytmasi. Vizual nazorat bilan, qon tomirda mikroorganizmlarning bemalol ozuqa moddasi yuzasida o'sishi ko'rib chiqiladi. Agar insultning o'sishi bilmagan bo'lmasa, unda madaniyat ifloslangan deb hisoblanadi. Biroq, bunday nazorat faqat zich ozuqa vositalarining er yuzasida o'sishga qodir ekinlar uchun mumkin. Shuning uchun madaniyatning pokligi mikroskop ostida boshqarilishi kerak. Buning uchun preparatni bo'yab qo'yilgan hujayralar tayyorlang va uni erishi bilan ko'rib chiqing. Toza madaniyat morfologik jihatdan bir hil bo'lishi kerak va hujayra hajmining ozgina o'zgarishi bo'lishi mumkin.

Bakteriyalarning tizimli lavozimining ta'rifi belgilarni o'rganishni o'z ichiga oladi: morfologik, madaniyat va fiziologik biokimyoviy.

Madaniy belgilar

Madaniy yoki makroakfologik xususiyatlarga zich va suyuq ozuqaviy vositalarda mikroorganizmlarning o'sishining o'ziga xos xususiyatlarini o'z ichiga oladi.

Zichroq ozuqaviy vositalardagi balandlik.

Zich ozuqa moddalari er yuzida mikroblar koloniyalar, qon tomir yoki qattiq maysalar shaklida o'sishi mumkin. Koloniya aksariyat hollarda o'sgan bitta tipdagi hujayralarni ajratish deb ataladi. Hujayralar paydo bo'lganiga qarab, sirt, chuqur va pastki koloniyalar ajralib turadi. O'rta yuzasida o'sgan koloniyalar katta xilma-xillik bilan ajralib turadi. Ularning tavsifi bilan quyidagi xususiyatlar hisobga olinadi:

Koloniyalar shakli - yumaloq, amosoboid, noto'g'ri, rizoid va hk .;

Koloniya yuzasi - silliq, qo'pol, novjjid, burma, ajinlar, nordoning doiralari mavjud;

Koloniya profillari - tekis, konveks, krater, konus, markazdagi konveks, markazda tomchi bilan, markazda tushkunlikka tushdi, chet elda va hk .;

Yaltiroq va shaffoflik - yorqin, mot, motion, xiralashgan, chang, shaffof;

Rangli koloniya - Rangsiz (iflos oq ranglar rangsiz) yoki pigmentlangan - oq, sariq, oltin, to'q sariq, lilac, qizil, qora rangga qarang. Ayniqsa, pigmentni substratga kiritish;

Chetidagi koloniya - silliq, to'lqinli, tishli, pishirilgan, makkajo'xori va boshqalar;

Kolonki tarkibi - bir hil, jarima va qo'pol donador, reaktiv (koloniyaning qirrasi va tuzilishi kattalashtiruvchi shisha yoki mikroskopning kichik o'sishi bilan belgilanadi);

Koloniya kontseptsiyasi - Bu pastadirning koloniyasiga tegib, aniqlanadi. Koloniya, agar zich, yumshoq, shilliq membranadagi o'sib boraverish, qattiq, plyonka (butunlay olib tashlandi), mo'rt yoki plyonka.

Chuqur koloniyalar juda monotondir. Ko'pincha, ular yassilangan yasmiqqa o'xshaydi, proektsiyada uchli uchlari bilan tuxumdonlar shakli bor. Bir nechta bakteriyalarning koloniyalari chorshanba kuni filament o'sishi bilan jun nurlariga o'xshaydi. Chuqur koloniyalarning shakllanishi ko'pincha zich muhitning uchi bilan birga bo'lsa, gaz hosil bo'ladi. Turli xil mikroorganizmlarning pastki qismidagi pastki koloniyalari pastki qismida qo'shiladigan ingichka shaffof filmlar shaklida.

O'lchamlari va koloniyalarining ba'zi belgilari yoshi bilan o'zgarib, shunda ularning tavsifi, madaniyatning yoshi, madaniyatning tarkibi ko'rsatadi.

Qon tomirida mikroorganizmning o'sishini tavsiflashda quyidagi xususiyatlar qayd etiladi: o'sish yumshoq yoki to'lqinli yoki to'lqinli chetida, ya'ni silliq yoki to'lqinli chetida, ya'ni alohida yoki to'lqinli chetida, ya'ni alohida koloniyalar, diffuzli koloniyalar zanjiriga o'xshash, daraxt -Shib ketgan yoki rizid. Plitaning optik xususiyatlarini, uning rangini, sirtini va izchilligini tavsiflang.

Suyuq ozuqaviy vositalardagi balandlik.

Suyuq ozuqaviy mediadagi bakteriyalarning o'sishning quyidagi shakllari ajratiladi:

Lounge o'rta. Bunday o'sish ixtiyoriy anaerobov guruhiga tegishli ko'plab patogen mikroblarga xosdir.

Dindonning o'sishi. U sinov naychasining pastki qismida cho'kindi hosil bo'lishi bilan ajralib turadi. Bu tanqis yoki mo'l, ko'p, krroshyroid, bir hil, tolali yoki katta bo'shashgan bo'lak shaklida bo'lishi mumkin. Cho'kinchik izchilik - bu viskoz, shilliq qavat, mo'rt yoki past. Agar madaniyat pigmentni shakllantirmasa, vositaning rangi o'zgarmaydi va yog'ingarchilik kulrang oq yoki sarg'ish rangga ega bo'ladi. Dindon o'sishi anaerob nafas olish turi bo'lgan bakteriyalarga xosdir.

Priucian o'sishi Bakteriyalar naychaning ozuqaviy muhit shaffofligicha qolmoqda. Bakteriyalar katta bo'sh bo'lak yoki stanka devorlarining ichki yuzasiga biriktirilgan katta bo'sh bo'lak yoki ixcham donalar shaklida o'sadi.

Yuzaki o'sish Bakteriyalar filmning suyuq ozuqaviy vositasining yuzasi paydo bo'lishi bilan tavsiflanadi. Film tebranish yoki chayqashda, nam, yopishqoq, shilliq pardalar, zich, quruq, zich, quruq, uni dumaloq disk sifatida to'liq olib ketishda g'oyib bo'lishi mumkin. Ko'pincha suyuq ozuqaviy vositada mikroorganizmlarning o'sishi gaz va hid paydo bo'lishi bilan birga keladi.